比特派钱包最新版app下载|培养基种类
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2024-03-08 02:29:11
培养基_百度百科
百度百科 网页新闻贴吧知道网盘图片视频地图文库资讯采购百科百度首页登录注册进入词条全站搜索帮助首页秒懂百科特色百科知识专题加入百科百科团队权威合作下载百科APP个人中心培养基[péi yǎng jī]播报讨论上传视频供微生物、植物和动物组织生长的营养基质收藏查看我的收藏0有用+10本词条由“科普中国”科学百科词条编写与应用工作项目 审核 。培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，最好现配现用。 [1]中文名培养基外文名Medium作 用供微生物、植物和动物组织生长成 分水、氮源、无机盐、碳源等保存方法防潮、避光、阴凉处保存保存温度2-25℃特殊营养物质维生素、氨基酸、碱基等目录1简介2培养基的配制3配置原则4分类▪化学分类▪物理分类▪培养功能分类5常见培养基▪细菌培养基▪放线菌培养基▪微藻培养基▪真菌培养基▪食用菌菌种培养基▪烟草的培养基▪动物细胞培养基6特殊培养基7鉴别培养基8天然培养基9培养基配制10制备基本方法11注意事项简介播报编辑培养基培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有水、氮源、无机盐（包括微量元素）、碳源、生长因子（维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。培养基的配制播报编辑1.配料配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃ ，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。3.调PH用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。4.过滤滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去）5.分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。（1）三角瓶若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。（2）试管分装液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度；固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。6.包扎分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。7.灭菌按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。8.摆斜面灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。9.贮存培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。配置原则播报编辑1、选择适宜的营养物质总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物组成。例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌（Thiobacillus thiooxdans）的培养基组成见表3.9。在该培养基配制过程中并未专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。2、营养物质浓度及配比合适培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累，其中碳氮比（C/N）的影响较大。严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。再如，在抗生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中速效氮（或碳）源与迟效氮（或碳）源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。3、控制pH条件培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是，在微生物生长繁殖和代谢过程中，由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累，会导致培养基pH发生变化，若不对培养基pH条件进行控制，往往导致微生物生长速度下降或（和）代谢产物产量下降。因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐（如KH2PO4和K2HPO4）组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性，KH2PO4溶液呈酸性，两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时，H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物，培养基pH不会过度降低；如果培养基中OH-浓度增加，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH也不会过度升高。但KH2PO4和K2HPO4缓冲系统只能在一定的pH范围内（6.4-7.2）起调节作用。有些微生物，如乳酸菌能大量产酸，上述缓冲系统就难以起到缓冲作用，此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐（如CaCO3）来进行调节，CaCO3难溶于水，不会使培养基pH过度升高，但它可以不断中和微生物产生的酸，同时释放出CO2，将培养基pH控制在一定范围内。在培养基中还存在一些天然的缓冲系统，如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质，也可起到缓冲剂的作用。4、控制氧化还原电位（redox potential）不同类型微生物生长对氧化还原电位（F）的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3—+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。F值与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下，可通过增加通气量（如振荡培养、搅拌）提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而增加F值；在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。5、原料来源的选择在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。例如，在微生物单细胞蛋白的工业生产过程中，常常利用糖蜜（制糖工业中含有蔗糖的废液）、乳清（乳制品工业中含有乳糖的废液）、豆制品工业废液及黑废液（造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆）等都可作为培养基的原料。再如，工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料，而在我国农村，已推广利用人畜粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。另外，大量的农副产品或制品，如鼓皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。6、灭菌处理要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基用1.05kg/cm2，121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中，长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖，因此含糖培养基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分钟进行灭菌，某些对糖类要求较高的培养基，可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合；长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子（特别是钙、镁、铁离子）结合形成难溶性复合物而产生沉淀，因此，在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时，常需在培养基中加入少量螯合剂，避免培养基中产生沉淀，常用的螯合剂为乙二胺四乙酸（EDTA）。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌，然后再混合，避免形成沉淀；高压蒸汽灭菌后，培养基pH会发生改变（一般使pH降低），可根据所培养微生物的要求，在培养基灭菌前后加以调整。在配制培养基过程中，泡沫的存在对灭菌处理极不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使泡沫中微生物难以被杀死。因而有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生，或适当提高灭菌温度。分类播报编辑化学分类1．天然培养基：天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。常用的天然有机营养物质包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培养基成本较低，除在实验室经常使用外，也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。2．组合培养基：合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计而配制的培养基。例如，高氏1号培养基和查氏培养基等。合成培养基有一定的配方，配制合成培养基时重复性强，但与天然培养基相比其成本较高，微生物在其中生长速度较慢，一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。 [2]3．半组合培养基：指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如，马铃薯蔗糖培养基。物理分类固体培养基1．液体培养基：80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。2．固体培养基：一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。3．半固体培养基：指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。4．脱水培养基：又称预制干燥培养基，指含有除水分外的一切成分的商品培养基。培养功能分类选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。鉴别培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。例如，伊红美蓝乳糖培养基（EMB）。常见培养基播报编辑细菌培养基（1）牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3g ，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，琼脂1.5g，水100ml在烧杯内加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6，分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。（2）牛心培养基细菌培养基取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。（3）根瘤菌培养基葡萄糖10g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙3g，硫酸镁0.2g，酵母粉0.4琼脂20g，水1000ml，1%结晶紫溶液1ml。先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。放线菌培养基（1）淀粉硝酸盐培养基（高氏一号培养基）可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。（2）面粉琼脂培养基面粉60g，琼脂20g，水1000ml把面粉用水调成糊状，加水到500ml，放在文火上煮30分钟。另取500ml水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。微藻培养基BG-11培养基NaNO3 1.5g，K2HPO4 ·3H2O0.04g，MgSO4·7H2O0.075g，CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid （柠檬酸）0.006g，Ferric ammonium citrate（柠檬酸铁铵0.006g，EDTA (dinatrium-salt) 0.001g，Na2CO3 0.02g，A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1ml Distilled Water （蒸馏水）919mlSE培养基NaNO30.25gK2HPO4 . 3H2O0.075gMgSO4 . 7H2O0.075gCaCl2 . 2H2O0.025gKH2PO40.175gNaCl0.025Soil extract40mlFeCl3·6H2O0.005Fe—EDTA1mlA5 solution 1000×1mldistilled water958mlSoil Extract（土壤提取液）配置方法取花园土未施过肥0.5kg置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热2小时，冷却数小时，在无菌条件下过滤，取上清液，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。土壤提取液保存在4℃备用。Composition of the A5 solutionAdd to 100 ml of distilled water:（加入100ml 的蒸馏水）H3BO3286 mgMnCl2 . 4H2O181 mgZnSO4 . 7H2O22 mgCuSO4 . 5 H2O7.9 mg（NH4）6Mo7O24 .4H2O3.9 mgEDTA-Fe的配置方法：将EDTA和FeCl3·6H2O分别溶于水和HCl（0.1N），混匀即可。Na2EDTA1gdistilled water50mlFeCl3·6H2O81 mgHCl（0.1N）50mlPr培养基Preparation: to 997 mL of glass-distilled water, add 1.0 g proteose peptone, 15.0 g agar, and the following stock solutions:working solutiong/1000 mL H2ONaNO30.25CaCl2. 2H2O0.025MgSO4. 7H2O0.075K2HPO40.075KH2PO40.175NaCl0.025A5 solution1mlEDTA-Fe1mlFeCl3 (0.05%)1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。真菌培养基（1）萨市（Sabouraud’s）培养基蛋白胨10g，琼脂20g，麦芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40g麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。（2）马铃薯糖琼脂培养基把马铃薯洗净去皮，取200g切成小块，加水1000ml，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加糖20g（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。把这培养基的pH值调到7.2-7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。（3）豆芽汁培养基黄豆芽100g，琼脂15g，葡萄糖20g，水1000ml洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000ml，分装，灭菌，备用。把这培养基的pH值调到7.2-7.4，可用来培养细菌和放线菌。（4）豌豆琼脂培养基豌豆80粒，琼脂5g，水200ml琼脂取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。食用菌菌种培养基（1）马铃薯-蔗糖-琼脂培养基20%马铃薯煮汁1000ml，蔗糖20g，琼脂18g把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200g，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000ml，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。（2）综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000ml，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，葡萄糖20g，维生素10mg，琼脂18g先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。烟草的培养基在植物组织培养时，通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。CTK/IAA高时，愈伤组织分化芽。CTK/IAA低时，分化根；CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化。愈伤组织诱导培养基制备以MS培养基母液为基础，向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，铁盐100×母液20mL，维生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培养基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入40g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0。加入14g琼脂，将铝锅置于电炉上，搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积2L，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。烟草烟草叶片愈伤组织诱导取一无菌培养皿，用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中，并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上，每瓶接种5小片，一共接种6瓶。接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周，然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成（两种情况各置3瓶）。观察愈伤组织诱导结果，统计愈伤组织诱导率。器官分化及植株再生培养将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照，温度20-22℃条件下培养3周，统计愈伤组织再生植株情况。愈伤组织诱导的总体情况烟草愈伤组织诱导培养4周后，愈伤组织基本形成，即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。具体情况见表一中所示。6瓶培养物均有愈伤形成，且都未发生污染，但诱导率几乎各不相同。其中，在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0%，在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%。由于实验过程中，外植体即烟草叶片取得偏小，接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡，使整个实验的愈伤组织诱导率偏低，愈伤块偏小。动物细胞培养基RPMI1640培养基是一个全营养型培养基，广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养，如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。最初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。特殊培养基播报编辑选择性培养基选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。酵母菌富集培养基葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化铵0.1%，磷酸二氢钾0.25%，磷酸氢二钠0.05%，七水合硫酸镁0.1%，七水合硫酸铁0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉红0.003%，pH4.5Ashby无氮培养基富集好氧自生固氮菌甘露醇1%，磷酸二氢钾0.02%，七水合硫酸镁0.02%，氯化钠0.02%，二水合硫酸钙0.01%，碳酸钙0.5%鉴别培养基播报编辑EMB培养基常用于鉴别E.coli蛋白胨10g，乳糖5g，蔗糖5g，磷酸氢二钾2g，伊红Y0.4g，美蓝0.065g，蒸馏水1000g，pH7.22216E培养基配方分离海洋微生物的培养基配方蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.01g，琼脂15-20g，陈海水1000ml，煮沸氢氧化钠（5%）的溶液调pH值7.6-7.8伊红美蓝培养基可用于检测水中大肠杆菌的含量首先按以下组成配制基础培养基。蛋白胨10g，NaCl5g琼脂15-20g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL，调节pH为7.6。灭菌后，冷却至60℃左右，再按下面的比例，在无菌操作条件下加入灭菌的乳糖溶液、伊红水溶液以及美蓝水溶液。摇匀后，立即倒平板。溶液中的乳糖在高温下会破坏，因此一般使用压力为70kPa、温度为115℃的条件灭菌20分钟。基础培养基100mL，20%乳糖溶液2mL2%伊红水溶液2mL，0.5%美蓝水溶液1mL天然培养基播报编辑天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。血清种类目用于组织培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。血清样本血清的主要成分血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。血清主要作用1．提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。2．提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。3．提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。4．提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。5．对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3、硒等。血清培养基主要问题1．血清的成份可能有几百种之多，对其准确的成份、含量及其作用机制不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难。2．血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制。3．对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。4．血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。5．动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。6．取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。7．大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。血清的质量标准血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：1．牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。2．有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。3．证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。4．血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。5．无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。6．对细胞有良好的支持繁殖作用。我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。培养基配制播报编辑一、配制用水培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。二、培养基培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。三、血清培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。四、抗菌素为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。制备基本方法播报编辑培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号。最终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。培养基pH的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2。而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH，保证培养基的质量。pH调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。注意事项播报编辑培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项：确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果；前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作（至少应在除菌后进行一次）。另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞（尤其是细胞库）的污染。 [3]新手上路成长任务编辑入门编辑规则本人编辑我有疑问内容质疑在线客服官方贴吧意见反馈投诉建议举报不良信息未通过词条申诉投诉侵权信息封禁查询与解封©2024 Baidu 使用百度前必读 | 百科协议 | 隐私政策 | 百度百科合作平台 | 京ICP证030173号 京公网安备110000020000细胞培养基类型及特点（细胞培养第一更） - 知乎
细胞培养基类型及特点（细胞培养第一更） - 知乎首发于那些值得一直学习的点滴切换模式写文章登录/注册细胞培养基类型及特点（细胞培养第一更）瞬间de回眸基础医学在读研究僧培养基种类经典的培养基有很多种，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是应用最广泛的培养基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下：1、BME细胞培养基基础 Eagle 培养基 (BME) 是一种广泛使用的合成基础培养基，可支持很多种类的哺乳动物细胞生长。BME 最初1955年由 Harry Eagle 针对 HeLa 细胞和小鼠成纤维细胞开发，其发现了体外细胞生长的最低要求。此后 BME 已用于其他人细胞系，包括 WI-38 和 MRC-5。BME 含有八种 B 族维生素、十种必需氨基酸以及胱氨酸、酪氨酸和谷氨酰胺以及酚红，不含有L-谷氨酰胺和HEPES。BME 不含蛋白、脂质或生长因子。因此，BME 需要补充营养成分，通常需要添加 10% 胎牛血清 (FBS)。BME 使用碳酸氢钠缓冲系统 (2.2 g/L)，因此需要 5-10% CO2 环境来维持生理 pH 值。在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM细胞培养基MEM (Minimum Essential Medium) 又称低限量Eagle培养基，1959年在Eagle's基础培养基（BME）上修改而来，删去赖氨酸、生物素，是一种较为常用的细胞培养基。MEM 可用于各种悬浮和贴壁的哺乳动物细胞的培养，包括 HeLa、BHK-21、293、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纤维细胞和原代大鼠星形胶质细胞等。 Harry Eagle此后对 MEM 进行了许多其他改良，包括 Glasgow’s MEM、MEM α、DMEM 以及 Temin’s 改良培养基。MEM 含有 Earle’s 平衡盐用于 CO2 培养箱，或含有 Hanks' 平衡盐用于无 CO2 培养箱。3、DMEM细胞培养基DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)是由Dulbecco改良的Eagle培养基，是一种广泛使用的基础培养基，可用于支持很多种类的哺乳动物细胞生长。已经在 DMEM 中成功培养出的细胞包括原代成纤维细胞、神经元、胶质细胞、HUVEC、平滑肌细胞，以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等细胞系。DMEM 与其他培养基的不同之处在于其含有相当于初始 Eagle 最低必需培养基 4 倍浓度的氨基酸和维生素。采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。DMEM 最初采用低浓度葡萄糖 (1 g/L) 和丙酮酸钠配制，但通常在含/不含丙酮酸钠的高糖环境下使用。后来将葡萄糖含量调整至(4.5g/L)，就是我们用的高糖DMEM。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。4、IMDM细胞培养基IMDM（Iscove's Modified Dulbecco's Medium，Iscove 改良杜氏培养基）非常适用于快速增殖的高密度细胞培养，包括 Jurkat、COS-7 和巨噬细胞。Guilber 和Iscove将Dulbecco' Medium 改良为 Iscove's Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养基包含硒和其他氨基酸及维生素。此外，这款独特的培养基不含铁，使用硝酸钾取代硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。5、RPMI-1640细胞培养基RPMI 1640 培养基 (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) 起初是1967年Moore等人研制，为了悬浮培养人白血病单层细胞而开发的。此后，RPMI 1640 培养基被发现适用于多种哺乳动物细胞，包括 HeLa 细胞、Jurkat 细胞、MCF-7 细胞、PC12 细胞、PBMC 细胞、星形胶质细胞和癌细胞。RPMI 1640 培养基相比其他培养基之所以具有独特的效果，是因为其中含有还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI 1640 培养基含有生物素、维生素 B12 以及 PABA，这些成分是 Eagle's MEM 和 DMEM 所不具备的。此外，该培养基之中还含有高浓度的维生素肌醇和胆碱。RPMI-1640包含 GlutaMAX、酚红；不包含 HEPES。6、HamF10细胞培养基1963年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。Ham's F-10 营养培养基可用于无血清生长的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞和需添加血清的多种哺乳动物细胞系的生长。7、DMEM/F12细胞培养基Ham's F-12 营养混合物 (F-12) 设计用于中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞的无血清单细胞铺板。自此之后，F-12 已用于 CHO 培养物的无血清生长以及其他哺乳动物细胞的添加血清生长，包括软骨细胞和大鼠前列腺上皮细胞。与其他基础培养基相比，F-12 含有更广泛的成分，包括锌、腐胺、次黄嘌呤和胸苷。F-12 不含蛋白质或生长因子。DMEM/F-12 是一种 1:1 DMEM 和 Ham's F-12 混合物。该配方将 DMEM 的高浓度葡萄糖、氨基酸及维生素与 F-12 的广泛组分结合在一起。DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12) 是一种广泛使用的基础培养基，可用于支持很多种类的哺乳动物细胞生长。已在 DMEM/F-12 中成功培养的细胞包括 MDCK、胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞及小鼠成纤维细胞。8、M199细胞培养基1950年Morgan等设计的具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199。199 培养基起初开发用于鸡胚成纤维细胞的营养研究。它具有广泛的物种适用性，特别适用于非转化细胞的培养。199 培养基广泛用于病毒学、疫苗生产以及小鼠胰腺上皮和大鼠晶状体组织原代外植体的体外培养。与其他基础培养基相比，199 培养基含有独特的成分，包括腺嘌呤、腺苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶和其他维生素。9、McCoy5A培养基1959年MeCoy为肉瘤细胞设计，BSS＋40种成分。可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。10、L15 细胞培养基Leibovitz L-15 培养基支持 HEP-2 猴肾脏细胞以及胚胎和成人组织的原代组织块生长。L-15 采用磷酸盐和游离氨基酸而非碳酸氢钠进行缓冲。L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。培养基成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。无机盐培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。缓冲系统大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是，细胞培养最适pH 值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠（NaHCO3）与CO2 体系进行缓冲，因此，气相中的CO2 浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2 浓度设定在5％，培养液中NaHCO3 的加入量为1.97g/L；如果CO2 浓度维持在10％，培养液中NaHCO3 的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES 是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH 指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。维生素在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源， 但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。其它成分在一些较为复杂的培养液中还包括其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的DMEM 培养液，使用时还需要补加丙酮酸钠和2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）。2-Me 对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清，有直接刺激细胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氢基，其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA 合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交瘤技术，另外，也开始用于一些难以培养的细胞。2-Me 是一种小分子还原剂，极易氧化。分子量为78.13，纯的2-Me 是一种无色有刺激味的液体，比重为1.110-1.120(Do20)，常用终浓度为5×10-5M。常配制成0.1M 的储存液，用时每升培养液加0.5ml。液体培养基保存：液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12 个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。发布于 2022-10-23 16:11细胞细胞培养生物实验赞同 322 条评论分享喜欢收藏申请转载文章被以下专栏收录那些值得一直学习的点滴这是一些适合学生学习，读研等的一些乱七八糟的
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全面解读细胞培养基！ - 知乎首发于细胞培养俱乐部切换模式写文章登录/注册全面解读细胞培养基！CellMax专注于细胞培养，欢迎大家来交流！1. 细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。1.1 平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5% CO2的培养条件。表1-1 几种常用的BSS配方（g/L） 1.2 天然细胞培养基天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，但缺点是成分复杂，来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，含丰富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成0.5 %溶液（采用平衡盐溶液溶解）与合成培养基（如MEM细胞培养基）以1:1的比例混合使用。目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5 ~ 20 %，最常用是10 %。由于水解乳蛋白和血清成份复杂，批间差异大及存在病毒等外源污染风险，对下游生物制品的分离纯化和安全性都存在较大的影响，在生物制药行业的使用也越来越少。因此，基于对血浆成份的分析，合成细胞培养基应运而生。1.3 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基（minimal essential medium, MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM 、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见表1-2。 表1-2 常用合成培养基的特性及应用的范围与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的做法是添加5 ~ 10 %的血清，这样才能维持细胞活力，促进细胞增殖。针对不同的动物细胞，现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方，营养成份更加丰富，血清使用量可降低至1～3 %，由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。1.4 无血清细胞培养基（serum free medium，SFM）经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。无血清培养基，一般是在合成培养基的基础上，加入成份完全明确的或部分明确的血清替代成份，达到既能满足动物细胞培养的要求，又能有效克服使用血清所带来问题的目的。无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分，才能帮助细胞贴壁生长，包括以下几大类物质：1）促贴壁物质：一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2）促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。3）酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中需含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。最常用的是大豆胰酶抑制剂。4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是最常见的。1.5 无蛋白无血清细胞培养基与化学组份限定无血清细胞培养基1）无蛋白无血清细胞培养基（protein free midium, PFM）这类培养基完全不含有动物来源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及类固醇激素和脂类前体等，以替代动物激素、生长因子的作用。其特点是完全没有蛋白或蛋白含量极低，有利于生物制品的分离纯化。2）化学组份限定无血清细胞培养基（Chemically defined media, CDM）此类培养基是目前最安全、最为理想的无血清细胞培养基，所有成份的浓度都完全明确，即使其所添加的少量蛋白，也是可经过纯化处理，成份明确、浓度确定的蛋白。这类培养基较为理想地减少了生产的可变性，提高了生产工艺的重复性，并有效降低了纯化成本。1.6 个性化细胞培养基严格意义上来说，个性化细胞培养基不在细胞培养基的传统分类之列，其具体是指一类根据细胞特性、细胞培养工艺特点、使用者需求习惯而量身定制的细胞培养基，主要目的是提高细胞产率、产品质量、产品安全性和降低血清的使用等。个性化细胞培养基可能是无血清培养基，也可能是低血清培养基，最终是为满足某一种或某一类生物制品的生产需求。2. 培养基的基本组分细胞培养基必须含有充分的营养物质，才能满足新细胞合成、细胞代谢等生化反应所需要的物质和能量。细胞培养基的主要成份是水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助营养物质等。此外，还可能含有血清、血清替代成分、pH指示剂等。2.1 水水是细胞的主要成份，也是细胞赖以生存的主要环境。细胞培养液中90 %以上的成份是水。细胞对水的品质非常敏感，水的品质将直接影响细胞培养的效果。而水中通常含有重金属、氯、磷、有机物、热原等污染物，细胞培养用水须经过纯化，品质应符合中国药典注射用水标准或者超纯水的标准。2.2 能源和碳源能源和碳源是用于维持细胞生命和支持细胞生长，主要包括糖、糖酵解的产物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物质。细胞能够利用的糖类主要是六碳糖，目前大多体外培养时选取葡萄糖作为细胞的主要碳源和能量来源，因此细胞培养基中基本都含有葡萄糖，含量一般为5～25 mmol/L。在葡萄糖浓度较高时，细胞主要通过扩散作用吸收葡萄糖，细胞膜内外的葡萄糖浓度梯度是细胞吸收葡萄糖的动力；在葡萄糖浓度较低时，主要由钠离子推动的高亲和性转运过程使细胞摄取葡萄糖。葡萄糖进入细胞后参与糖酵解、核酸代谢、糖原合成、能量代谢以及一些氨基酸的合成。与体内的能量供应途径不同，体外培养时，一定的浓度范围条件下，葡萄糖主要经糖酵解循环转化成乳酸来为细胞提供能量。2.3 氮源（氨基酸）氨基酸在细胞内的重要生理作用主要体现在以下几个方面：① 是蛋白质的基本组成单位，用于合成蛋白质和多肽；② 可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③ 某些氨基酸还具有独特的生理作用，如甘氨酸参与生物转化作用，丙氨酸和谷氨酰胺参与细胞内氨的运输等；④ 可转变成糖类和脂肪，参与氧化供能。细胞所能利用的氨基酸是L型同分异构体，D型氨基酸不能被利用。不同的细胞对氨基酸的需求各异，但有些必需氨基酸是细胞不能自身合成的，必须依靠外源的细胞培养液提供。其余非必需氨基酸，细胞可以自己合成，或通过转氨作用由其他物质转化而来，但是在细胞培养基中添加适当浓度的非必需氨基酸可以减轻细胞在合成方面的负担，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求，可能因其不仅是细胞的主要氮源，且可作为细胞生长的能源物质和嘌呤、嘧啶核苷酸的前体，另外还可直接作为细胞增殖和产物合成中的蛋白质和多肽的组成成分。在缺少谷氨酰胺时，细胞会生长不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多种生理作用，体外动物细胞培养时需要大量谷氨酰胺，利用量常超过其他必须氨基酸利用量的总和。2.4 维生素维生素是维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。维生素可分为水溶性和脂溶性两类，水溶性维生素主要包括泛酸、维生素B12、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黄素、维生素C、胆碱、肌醇等；脂溶性维生素主要包括维生素A、D、 E、K等；有的培养液中还直接采用ATP和辅酶A；大部分培养基中还有生物素。许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。比如，泛酸可以在细胞内转变成酰基载体蛋白和辅酶（如辅酶A），参与糖类、脂类和蛋白质代谢中的催化反应；维生素B12则在细胞内参与叶酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的细胞培养基中维生素的浓度有较大差异。例如，DMEM培养基中维生素的含量约为MEM培养基的两倍，其原因是一方面不同种类维生素的作用不同，另一方面不同种类的细胞对维生素的需求也可能有较大差异，相应细胞培养基的配方中维生素的含量也可能不同。2.5 无机盐无机盐是细胞维持生命活动所不可缺少的营养成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用为维持细胞培养液渗透压平衡，参与细胞的代谢活动。此外，通过提供钠，K+和Ca2+，帮助细胞调节细胞膜功能。Na+是细胞外液中最主要的阳离子，对维持渗透压的恒定有决定性的作用，还与Cl－共同参与生物电活动、维持水平衡和酸碱平衡等。K+主要分布在细胞内液，对于激活某些酶是必需的，并在调节细胞内环境的酸碱平衡上也有极重要意义。Ca2+和Mg2+主要参与信号传导、能量代谢、脂肪酸合成、核糖体稳定和蛋白质合成等多种生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基质所需阴离子，同时是细胞内电荷的调节者。磷对于细胞的生长、代谢和调控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白质是构成细胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存储和利用的不可或缺的化合物。上述离子对于细胞的作用各有不同，它们共同构成了细胞赖以生存的渗透压、pH和电化学平衡的微环境，细胞对于某种元素的吸收利用会受到其它元素的干扰，例如培养基中过高的钙离子浓度会使镁和锌的吸收利用受到干扰。因此，在保证培养基中上述离子浓度满足要求以外，还需保证上述离子之间种类和比例的平衡。此外，微量元素如铁、钴、镍、硒、碘、铜、锌、锰、铬、钼、氟等对于细胞生长代谢和产物合成都有促进作用。微量元素在细胞内通常以与有机物结合的形式存在。其中铁在细胞中参与氧的转运；钴是维生素B12的组成部分，参与叶酸的合成和脂肪酸的合成；镍能够激活脱氧核糖核酸酶、乙酰辅酶A合成酶等在细胞内具有重要功能的酶，还具有稳定核酸结构的功能；亚硒酸钠中的硒，作为谷胱甘肽过氧化物酶的辅基，具有抗过氧化物能力，参与消除细胞内的脂肪酸过氧化物，提高细胞的生长速率和活性。2.6 其他添加成分在低血清、无血清细胞培养基中，为满足细胞生长增殖需要，常常添加一些成份：蛋白质、多肽、核苷、嘌呤、柠檬酸循环的中间产物、脂类、及一些血清替代因子等。其中蛋白质具有重要的作用，动物细胞对许多物质（难溶于水的离子或脂类物质）的摄取需要借助蛋白质的传递作用，如白蛋白、传递蛋白、贴壁蛋白等能够携带脂肪酸、激素、矿物质等促进细胞生长。转铁蛋白是一种重要的传递蛋白，能够结合铁，促进细胞对铁离子的吸收，并具有解毒作用，其促生长作用可能与其具有生长因子的功能有关。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的利用，商业化中一些生长因子以重组蛋白形式添加到培养基中，主要用来刺激细胞增殖，并可促进糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一种重要的刺激细胞生长的化合物，是脑磷酸的合成前提。另外，酚红作为pH值的指示剂被加入到细胞培养基中。酚红在产物纯化过程中会造成干扰，并且具有一定的固醇类激素样作用，如雌激素样作用。当用于哺乳类动物细胞的培养，可能会发生一些固醇类反应。现在商业化细胞培养基中的酚红含量可根据需求调整。因生物反应器具有pH在线检测技术，生物反应器培养动物细胞时，酚红可完全去除。2.7 保护剂细胞保护剂是保护细胞免受渗透压变化、剪切力、氧化及气泡作用等引起的损伤的物质。在使用生物反应器培养动物细胞时，细胞易被机械搅拌和通气鼓泡产生的流体剪切力和气泡作用所伤害甚至破损死亡。为降低这种损伤，除优化生物反应器结构和生产工艺外，可在细胞培养液中添加一些保护剂。其主要是通过改变细胞培养基物性或是对细胞具有保护作用的物质，常用的种类有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非离子性表面活性剂PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3. 细胞培养基的理化性质动物细胞在细胞培养基中不仅能存活，还要分裂增殖，合适的渗透压、pH值等理化性质是细胞培养基必须具备的前提条件。3.1 pH动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，适宜pH在7.2～7.4之间。细胞培养基的pH值通常需经校正的pH计来测定。在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中最常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验积累，存在较大的主观性。实际上，个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红，只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测，结果更为准确可靠。3.2 缓冲能力 细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液 pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，细胞培养液pH 很快下降；打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值：H2O + CO2 → H2CO3 ⇌ H+ + HCO3－NaHCO3 ⇌ Na+ + HCO3－此外，还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低，在细胞培养中应用得更为广泛。另一种较为常用的缓冲液是HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一种非离子两性缓冲液，在pH 7.0 ~ 7.2范围内具有较好的缓冲能力。高浓度的HEPES可能对细胞有毒性作用，细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10～25 mmol/L。3.3 渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示，对于大多数哺乳类动物细胞，渗透压在260～320 mOsm/kg的范围内都适宜。在生产、配制细胞培养基的过程中，渗透压的测定较为重要，有助于防止在生产、配制过程中出现称量等方面的错误。反应器高密度培养动物细胞过程，在添加碳酸氢钠的过程中注意渗透压的监控，防止渗透压过高对细胞的损害。3.4 温度温度对细胞培养基有较大的影响，温度过高可引起营养成份的降解或破坏，细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。如细胞培养液中的谷氨酰胺，在高温条件下降解的速度较快，如35 ℃贮存时，放置3天降解25 %左右，在4 ℃贮存3周降解约20%。3.5 粘滞性及表面张力含血清细胞培养液的粘滞性主要是由血清引起的，在转瓶培养贴壁细胞时，培养液的粘滞性对细胞生长没有多大影响；但在生物反应器悬浮培养细胞时，细胞培养液的粘滞性则直接影响搅拌转速控制及搅拌剪切力对细胞造成的损伤程度。表面张力对细胞培养有较大的作用，尤其在利用生物反应器进行悬浮培养时，搅拌和通气都会引起泡沫的产生。对于含血清培养液，由于血清中多种蛋白的存在，搅拌时产生的气泡较多，气泡的上升运动对细胞的损伤程度还有争议，但气泡的破裂对细胞有明显的损伤作用。为降低这种损伤，可通过在细胞培养基中添加一些保护剂，降低细胞-气体和细胞-液体的表面张力，减少气泡的形成。4. 细胞培养基的灭菌及储存4.1不同细胞培养基的除菌方式及注意事项细胞培养基灭菌的方式分为高压灭菌和膜过滤除菌，不同的培养基由于其营养成份不同，灭菌方式也可能不同。① 高压灭菌某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15 psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。绝大多数细胞培养基不适宜高压灭菌。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤除菌是当前较为常用及便捷的一种方法，常采用0.2 μm孔径的滤膜，部份采用0.1 μm孔径。与高压过滤方式相比，滤膜具有使用期限且价格较高，但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。4.2 不同细胞培养基存储过程中的注意事项通常液体细胞培养基避免-20 ℃冻存，因为解冻时可能会有营养成份析出，影响培养效果。正常情况下于2 ~ 8 ℃避光保存，使用前从冰箱取出，放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存，其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，如果细胞生长不良，可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期，对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后，也应低温（2 ~ 8 ℃）贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外，培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5. 细胞培养基使用过程中常见问题分析5.1 细胞培养基的缓冲系统选择及pH变化问题 由于大多数细胞适宜的pH为7.0~7.4，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。MEM低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统，该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。 细胞培养过程中pH值下降产生的原因有很多。在细胞生长非常快时，pH值通常下降得很快，此时可以通过及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外，培养瓶盖拧得过紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。这时，可以通过以下几种方法解决： 1）增加培养液中NaHCO3浓度或减少培养箱内CO2浓度。NaHCO3含量在2.0 g/L到3.7 g/L之间时对应的CO2浓度为5~10%；2) 改用不依赖CO2培养液；3) 适当松开瓶盖。在培养液中加HEPES缓冲液，使终浓度为10~25 mM；4) 在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks’盐配制的培养液；5) 如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。5.2 细胞培养基常用几种重要的添加成份及使用过程中应注意的问题酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34 g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。原文：全面解读细胞培养基！发布于 2020-09-27 14:25细胞生物学肿瘤细胞干细胞赞同 1659 条评论分享喜欢收藏申请转载文章被以下专栏收录细胞培养俱乐部细胞技术维基
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培养基的分类，史上最全介绍（摘抄微生物培养基使用手册）
2022-05-30 11:29
来源:
环凯微生物
发布于：广东省
原标题：培养基的分类，史上最全介绍（摘抄微生物培养基使用手册）
由于微生物的种类繁多，对营养物质的需求各不相同，所需要的培养基成分复杂，品种繁多，据不完全统计，目前常用的培养基约有1700余种，而且，随着生物科学的发展，培养基的种类也在不断增加。培养基的分类方法目前尚未统一，一般常按培养基的成分、物理状态、用途等加以区分。
一、按成分分类
1、天然培养基( native medium)
2、合成培养基(synthetic medium)
二、按形态分类
1、液体培养基(liquid nutrient medium)
2、流体培养基(semi-liquid medium)
3、半固体培养基(half-solid medium)
4、固体培养基(solid medium)
三、按用途分类
1、基础培养基(basic media)
2、营养培养基(nutrient media)
3、增菌培养基(enrichment media)
4、选择性培养基(selective media)
5、鉴别培养基(differential media)
6、厌氧菌培养基(anaerobic media)
展开全文
7、细胞培养液(liquid of culture cellulae)
一、按成分分类
根据培养基的组成成分，可分为天然培养基和合成培养基两大类。
1、天然培养基(native medium) 含有不完全明了化学成分的天然物质。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米浆、血液、马铃薯等。用此类材料配成的培养基很难做到不同批号之间质量的稳定一致，因此在选用原料时务必注明其商品名称、生产厂家及批号，对不同来源的原料应先做小样试验。此种培养基成本较低，细菌繁殖较好，一般细菌培养以选用天然培养基为主。
2、合成培养基(synthetic medium) 由已知化学成分的营养物质组成的培养基。根据微生物对营养要求的不同，可完全由无机盐或化合物组成，如：氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、维生素等，其组成成分已知，只要严格操作，各批次间质量可做到稳定一致。此培养基可用来检测某种营养物或药物对微生物代谢的影响。组织细胞培养液均属合成培养基。合成培养基的成本较高，其价格相当于同类天然培养基的几倍以至于几十倍。只含几种无机盐的合成培养基，仅适用于自养菌的培养，如培养亚硝化细菌、氧化硫杆菌等的培养基。有些培养基大部分成分为已知化学结构的营养物质，其中的个别或少数成分为未明化学成分的必须营养物，成为半合成培养基，如百日咳菌苗生产用的水解酪素培养基。
二、按形态分类
培养基按其不同的物理状态，可分为液体、流体、半固体和固体4类，培养基的物理状态取决于培养基中是否加人凝固剂或凝固剂的加入量。
1、液体培养基(liquid nutrient medium) 不加任何凝固剂，常温下以完全液态存在的培养基，如肉汤培养基或一般液体增菌培养基。
2、流体培养基(semi-liquid medium) 在液体培养基中加入0.05%~0.1%的琼脂粉，使其具一定黏度，即成流体培养基。加入琼脂粉增加了培养基的黏度，降低空气中的氧气进人培养基的速度，能使培养基保持较长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧菌的生长繁殖，如硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基等。一般用于霉菌和厌氧菌检查的液体培养基中可加人少量琼脂使其成为流体培养。
3、半固体培养基(half-solid medium) 在液体培养基中加人0.2%~0.5%的琼脂粉，加热溶解后冷却即成，以倒置不流动的最软状态为宜，一般供细菌动力试验、菌种传代、保存和储运标本之用。
4、固体培养基(solid medium) 培养基中含有足量的凝固剂(琼脂粉>0.5%)，在常温下能保持固体状态。此类培养基大都用于微生物的分离、纯化、药敏试验及菌苗制造。如营养琼脂、营养斜面、SS琼脂、TCBS琼脂等。此外，还有一些特殊用途的培养基，如用血清或鸡蛋做凝固剂配成的吕氏血清斜面培养基、鸡蛋斜面培养基等。
三、按用途分类
根据用途不同，培养基可分为基础培养基、营养培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基、厌氧菌培养基等。
1、基础培养基(basic media) 大多数微生物共同需要的营养基础。某--微生物如有特殊需要，可在此基础上添加某种成分即可，如蛋白胨水、肉汤培养基、营养琼脂等。1%蛋白胨水培养基便是一个最简单的基础培养基，该基础培养基本身可供一般细菌增菌培养和靛基质试验用，若再加入指示剂和糖类，则配成糖发酵培养基，供糖发酵试验用，成为鉴别培养基；若在1%蛋白胨水中增加氯化钠用量并将pH提高到8.6左右，则变成碱性蛋白胨水，用于霍乱弧菌的增菌培养，成为专用增菌培养基。
2、营养培养基(nutrient media) 在基础培养基中添加一些特殊的营养物质，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等，可供营养要求较高的细菌在其中生长。例如链球菌、肺炎链球菌等需在含血液或血清的培养基中生长；结核分枝杆菌的培养基中须添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。最常用的营养培养基是血琼脂平板。
3、增菌培养基(enrichment media) 一般为液体培养基，用于细菌的增菌培养，可泛用，也可专用，在专用增菌培养基中常含有目的菌生长所需要的特殊营养物质或生长因子。
4、选择性培养基(selective media) 选择性培养基含有营养物(增菌剂)和抑菌剂(选择剂)，标本接种于此类培养基后，由于抑菌剂的选择性抑制作用，使非目的菌受到不同程度的抑制，更有利于目的菌的增殖或分离。利用选择性培养基经过一定时间的增菌培养，再接种于选择性鉴别培养基，可以提高目的菌的阳性检出率。抑菌剂的种类很多，常用的有孔雀绿、灿烂绿、亚硒酸钠、去氧胆酸钠、胆盐、四硫磺酸钠、各种抗生素等。抑菌剂的加入量要适宜、准确，有的剧毒，有的不耐高热，配制时须特别注意。
5、鉴别培养基(differential media) 在培养基中加入某一反应底物和指示剂，以区别某些微生物的特性从而鉴别之。又分一般鉴别培养基和选择性鉴别培养基。只用于区别不同微生物种类的培养基称为-般鉴别培养基，此类培养基中一般不加抑菌剂而只含指示剂，如克氏双糖铁培养基，含有葡萄糖及乳糖，以酚红作为指示剂，观察培养基底层与斜面的颜色变化判定细菌对葡萄糖和乳糖的发酵能力，加人柠檬酸铁铵，培养后观察是否产生黑色沉着以判定细菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而产生硫化氢；又如伊红-美蓝琼脂，含有乳糖(反应底物)、伊红-美蓝(指示剂)用以鉴别大肠埃希菌、肠道病原菌和其他杂菌。一般鉴别培养基的特点是在配方中都含有指示剂，并可用于区别不同种类的微生物，有些鉴别培养基也可同时作为细菌的特殊需要用来分离培养某些细菌，如胰酪胨大豆琼脂和巧克力色血琼脂。
在培养基中加人某种抑制剂和指示剂，抑制某些细菌生长，促进目的菌的繁殖，并使所生长的细菌菌落具有一定特征，以助鉴别挑选，这类培养基称为选择性鉴别培养基。如SS琼脂，在该培养基配方中含有乳糖(反应底物)、中性红和柠檬酸铁铵(指示剂)、灿烂绿及胆盐等(抑菌剂)。灿烂绿和胆盐等抑菌剂能抑制革兰氏阳性菌及部分大肠埃希菌的生长，而对沙门菌及志贺菌基本无影响，而且大肠埃希菌能发酵乳糖产酸，使菌落变红色，沙门菌和志贺菌不发酵乳糖，其菌落为无色。如细菌产生硫化氢，则与柠檬酸铁铵反应生成硫化亚铁沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此达到鉴别的目的。
近年来，国内外利用某些细菌特有的酶，选择相应的作用底物，研制出某些细菌专用的显色培养基，用于细菌的分离鉴别，收到了良好的效果，这种显色培养基实际上也是鉴别培养基。其基本原理是将色原(或荧光原)与细菌作用底物的结合物加于培养基中，当细菌含有相应酶时，使该结合物分解而显色(或显示荧光)。如色原糖苷结合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷与色原分离，并显示颜色；荧光氨基酸结合物(不显荧光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸与荧光物质分离而显示荧光。常用显色的色原有α-萘酚、β-萘酚、邻位硝基酚、对位硝基酚、对硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的荧光物有4-甲基伞形酮(又称7 -羟基4-甲基香豆素)等。目前，显色培养基已用于多种细菌或真菌的分离鉴别培养，如沙门菌、大肠埃希菌、李斯特菌、双歧杆菌和乳酸杆菌、白色念珠菌等显色培养基。
还有一些鉴别性培养基，是利用细菌特有的各种酶系统，能分解利用各种特定的糖、醇、氨基酸或其他基质而产酸、产气、产碱或产生其他可见物质，依此进行细菌的鉴别，例如常用的生化培养基。
用于细菌生化特性试验的培养基特点是在无糖的基础培养基中加人某种特定的基质，并加人指示剂，细菌在此类培养基中的一系列生化反应结果，均通过指示剂最终显示出来。此类培养基为生化反应鉴别培养基。根据用量又可分为常量生化培养基和微量生化培养基。值得注意的是生化试验培养基的某些成分受高温、pH等诸多因素的影响，在配制和使用时，应根据实际情况严格掌握，防止有效成分被破坏，以保障其使用效果。
6、厌氧菌培养基(anaerobic media) 供厌氧菌的分离、培养和鉴别用的培养基，称为厌氧菌培养基。由于厌氧菌自身缺乏有氧代谢所必需的各种酶，如细胞色素和细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶、超氧化歧化酶，所以造成自身代谢的缺陷，无法进行有氧代谢，而无氧酵解所产生的能量又不足，因此厌氧菌在正常的大气环境下不能生长和生存。为使厌氧菌能正常生长，必须制备营养成分丰富，氧化还原电势较低，具有特殊生长因子的专用培养基。
通常用心、脑或其他脏器浸液配制厌氧菌培养基，并常需加入硫乙醇酸钠、半胱氨酸、肉渣、还原铁、活性炭等还原剂或除氧材料。在液体培养基中还可加入刃天青或亚甲基蓝作为氧化还原指示剂，以观察培养基的含氧程度。心、脑浸液、肝块、肉渣中含有不饱和脂肪酸，能吸收培养基中的氧。硫乙醇酸钠、半胱氨酸是较强的还原剂，能消耗溶解在培养基中的氧。干燥的活性炭和脱脂棉同样能吸收培养基中的氧。所以培养基中加入还原剂和吸收材料，目的都是为造成培养基的缺氧环境，使培养基保持较低的氧化还原电势。此外，还可在培养基表面加一层液体石蜡，以隔绝培养基与大气的接触。
7、细胞培养液(liquid of culture cellulae) 是指用于各种目的的体外培养、保存、运输活组织、器官及细胞的液体，实质为人工模拟体内生长的营养环境，使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。由于其成分数量明确并可通过调节某一种成分来观察被研究对象的各种生物学改变，被广泛应用于细胞生物学科的研究。细胞培养液的组成成分主要有水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、生长因子等，这些成分必须通过严格挑选，严格测试后方可使用，所用的水必须达到2级试验用水(CB/T 6682-1992)，所用的器皿必须清洁无污并进行高压灭菌或干烤去热源处理。返回搜狐，查看更多
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细胞学堂 | 细胞培养基的种类以及如何选择 - 知乎首发于细胞学堂切换模式写文章登录/注册细胞学堂 | 细胞培养基的种类以及如何选择普诺赛生物细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。本期为大家整理了常见的细胞培养基种类，接下来我们一起来了解一下这些培养基和适用的细胞类型及选择方法。一、常见的细胞培养基基础培养基（MM）基础细胞培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞保持良好的生长状态。培养基的种类有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是应用较为广泛的。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。具体的特征及应用如下：培养基特征应用BME细胞培养基1955年Eagle设计，以BSS为基础，添加8种维生素，13种氨基酸，成分简单、便于添加适于各种细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等MEM细胞培养基由Harry Eagle在Eagle基本培养基（BEM）的基础上发展而来的。MEM培养基仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素，成分简单，主要用于贴壁细胞的培养，1959年修改配方，删去赖氨酸、生物素，增加氨基酸浓度，配方修改后也可用于其他类型细胞培养适合多种细胞单层生长，是一种最基本、适用范围最广的培养基。因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。此外，MEM细胞培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。应根据实际情况注意选择合适的 MEM 细胞培养基M199细胞培养基1950 年由 Morgan 等设计，除 BSS 外，含有53 种成分添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，可用于病毒学、疫苗生产以及大鼠胰腺上皮细胞和小鼠晶状体组织的培养DMEM细胞培养基由Dulbecco改良的 Eagle 培养基，DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和 DNA 转染的转化细胞培养。例如 CHO 细胞表达生产乙肝疫苗、CHO 细胞表达EPOIMDM细胞培养基由Iscove's改良的Eagle培养基，IMDM培养基在DMEM培养基的基础上添加了硒、HEPES、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素，营养非常丰富可用于杂交瘤细胞和高密度细胞的快速培养RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等成分广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养，尤其是悬浮细胞的培养Ham's F10、F12细胞培养基1963年、1969年由Ham设计，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10营养混合物为基础设计而成的，可在血清含量低时用F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，F12适用于CHO细胞。在低血清含量下时，特别适合单细胞培养和克隆化培养，添加血清后也广泛应用于癌细胞和原代细胞的培养，如大鼠肝细胞、大鼠前列腺上皮细胞、软骨细胞、大鼠成肌细胞、鸡胚胎细胞等DMEM/F12细胞培养基在DMEM培养基的基础上，添加F12培养基中更为丰富的营养成分，含有多种微量元素广泛应用于多种哺乳类细胞的培养。同时，常作为开发无血清培养基的基础，也适用于低血清含量下哺乳动物细胞的培养以及克隆密度培养McCoy's 5A培养基Thomas McCoy等人在1959年设计的培养基，最初专门用于Novikoff Hepatoma细胞的培养。McCoy's 5A培养基是改良的Basal Medium 5A，与其他培养基不同的是，McCoy's 5A含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖McCoy's 5A广泛用于多种类型的原代细胞的培养，如骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等。此外McCoy's 5A培养基还用于组织活检培养、细胞建系，以及一些淋巴细胞和较难培养的细胞的培养L15细胞培养基L-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成，代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统，同时，用半乳糖和丙酮酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成，有助于维持培养液PH的稳定，适合用于非CO2平衡环境的细胞培养L-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代（如胚胎和成人组织）细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等完全培养基（CM）完全培养基是在基础培养基中添加了血清、抗生素等物质，也叫（血清）细胞培养基。其中大部分细胞培养常用的是牛血清，因为牛血清中含有促进细胞增殖的各种生长因子。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。无血清细胞培养基（SFM）无血清培养基是指在合成培养基的基础上引入成分完全明确或部分明确的血清替代成分，主要是由基础培养基和添加物（替代血清的补充因子）组成。其主要成分为下列几种：黏附因子约有80%的细胞是属于贴附型生长。一般的细胞培养基是利用血清作为其来源，在无血清培养基中，细胞黏附因子就是很重要的物质。生长因子生长因子是维持细胞活性与促进细胞增生、迁移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制剂贴附型细胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）进行传代。在一般细胞培养中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以无血清培养基必须添加trypsin抑制剂。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。优点：01 未知组分少；02 避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染；03 杂蛋白含量少，避免血清成分影响研究结果或是产品制程，提高产品表达水平并易于纯化。缺点：01 无血清培养基成本较高；02 不是所有的细胞都能在无血清培养基中培养；03 细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基保存和应用方面局限性很大。二、细胞培养基的选择细胞培养基的种类很多，如何选择适宜的培养基是细胞培养的关键。在此提供以下建议可供参考：01 如果是新购买的细胞，可以向细胞株的厂家咨询，或者询问引种来源查找细胞库上对应的培养基；02 根据细胞的特点及实验的需要来选择培养基；03 自己试验，用多种培养基培养细胞，做生长曲线，记录细胞的生长速度，观察细胞的形态变化，根据实验结果选择最佳培养基。培养基种类和细胞系并不是一个强制的对应关系。具体培养细胞使用什么培养基，主要还是根据数据库、文献和经验哦！发布于 2023-12-12 14:54・IP 属地湖北细胞细胞培养基细胞培养赞同 2添加评论分享喜欢收藏申请转载文章被以下专栏收录细
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15种细胞培养中常用培养基及基本特性
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关键词： 细胞培养 培养基
来源： 互联网
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细胞培养 中常用培养基及基本特性
1、RPMI-1640 Medium
RPMI-1640广泛应用于哺乳动物 、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium(MEM)
也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12
DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium)，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5A
McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)
Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为 Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
8、M-199 Medium
1950年，Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。
9、Leibovitz Medium (L-15)
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培养基：适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。
11、Ham’s F-12培养基：可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。
12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。
13、MCDB 131 培养液：用于培养内皮细胞。
14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培养造血细胞。
15、植物血凝素(PHA)：增加细胞转化和DNA合成。
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你所在的学校的补助在全国是什么水平？ 还记得你在读研时，所在学校的补助是多少吗~？读博的也可以说说呀。我的好少，有点想哭。 101 评论
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科研汪也想有春天：告诉我你们的另一半都在哪里找的？ 小伙伴们，请问你们的女（男）朋友是怎么找到的？（好给后来的朋友参考啊）是交友网站，还是七大姑八大姨介绍，还是同学自然成事？春天到了，我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧！ 41 评论
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细胞污染 悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点，在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心，然后加平时双倍量的抗生素，效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了，培养液也重新过滤了，个人操作也更加注意了，但仍然在复苏后出现细菌，苦恼！！！ 35 评论
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如何选择合适的细胞培养基？ - 知乎首页知乎知学堂发现等你来答切换模式登录/注册细胞细胞生物学微生物培养基如何选择合适的细胞培养基？关注者11被浏览23,617关注问题写回答邀请回答好问题添加评论分享10 个回答默认排序医学科研小坑山东农业大学 遗传学硕士 关注关注公众号“医学科研小坑”，了解更多相关科研技术内容！实验室新来了一个师弟，老板让其从养细胞开始。这个小师弟是个夜猫子，总喜欢深夜做实验。一天早上：小师弟：湿胸，昨天传的细胞没贴壁，培养液变成紫红色的了。是不是你给我的那皿细胞是不好的？科研狗：你操作没毛病？小师弟：绝对没毛病，严格遵循你的指示。为了怕孵箱细胞太多，我特意单独放在另外一个孵箱里。科研狗：等等，另外一个孵箱？没有接通CO2啊今天我们来聊一聊培养液中的颜色，一般情况下，我们购买回来的DMEM培养基都是鲜红色的，如下图：但是，作为老司机的你肯定也见过如下颜色的：还有这样颜色的：小师弟：师兄，你见过赤橙黄露青蓝紫的吗？科研狗：...1. 为什么这个DMEM培养基是鲜红色的？这个问题可以从如下两个方面来回答：业余回答：A 它总要有一个颜色吧，如果是绿色的或者你会问他为什么是绿色的B 红色的看上去有食欲，细胞自然喜欢吃了。你想想，给你一堆绿了吧唧的水果和给你一堆鲜红的水果，你喜欢吃哪一种？专业回答：培养基的颜色主要是酚红来显示的，酚红指示颜色非常灵敏，p值范围为6-8，颜色由黄变为紫红。酚红不是必须的，在有些情况下甚至是多余的，酚红有类似固醇类激素的作用，如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养，最好不要添加。但是为了培养方便，能让我们直观地感觉培养液的状况，加入酚红后，如果培养液偏酸了，就显示偏黄色，偏碱性了就显示偏紫色。2. 为什么培养皿放在一个没有开启CO2的孵箱里面，培养液颜色偏紫色？一般的DMEM使用的缓冲体系是NaHCO3， 初中的时候应该见过如下的方程2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O在没有CO2的孵箱中，培养液中的CO2一直溢出，碳酸变少了，溶液变碱性了，就偏紫色了。同时我们打开了很久的DMEM瓶里面的培养液也会慢慢偏紫色，也就是这个道理。 3. 什么时候溶液会变为黄色？这个简单，一般污染细菌的时候或者长时间不换液，溶液变为黄色主要是酸性物质太多，细菌和细胞过度增长都会产生酸性物质，溶液会变为黄色。4. 培养基偏紫色了还能用不？可以将该偏紫色的培养基置于CO2孵箱中，拧松瓶盖。一段时间之后你会发现颜色变为鲜红色了，那么可以继续接着用。但是不要使用过长时间未用完并且变色的培养液，置于空气下氧化之后培养基成分可能已发生了变化。5. 哪些情况下不得使用酚红？如前面所说的酚红有类似固醇类激素的作用，如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养，不要添加。另外在做流式细胞的时候，酚红会对结果产生影响，因此也不要添加。6. 有没有不受CO2影响的培养基？有，如果缓冲体系不是NaHCO3，而是其他体系如HEPES，就不受CO2的影响。7. 常用的培养基有哪些？MEM（Minimum Essential Medium）: 也称最低必须培养基，它仅含有12种必须氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。可以广泛应用到各种细胞培养。DMEM：分为高糖和低糖，碳酸氢钠缓冲体系，所以需要CO2。高糖的适合于高密度悬浮细胞培养，适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的细胞。低糖的适合于生长速度较快，附着性较差的肿瘤细胞培养。DMEM/F12：F12 培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较条件下哺乳动物细胞培养。RPMI-1640：主要用于悬浮细胞培养，广泛用于哺乳物，特殊造血细胞，正常或者恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞。另外K-562， L-60、urkat、IM-9 等淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞也可以使用。McCoy’s 5A : 主要用于肉瘤细胞的培养， 还可以用于骨髓、皮肤、肺等原代培养，用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。比如HT29，BHL100等上皮细胞。IMDM（Iscove’s Modified Dulbecco Medium）：主要用于红细胞和巨噬细胞前体培养。培养液中含有微量元素硒以及额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠以及HEPES。M199 Medium 是具有确定化学成分的细胞培养液，主要用于鸡胚成纤维细胞培养，培养时必须辅助血清才能长期培养。L-15(Leibovitz Medium) 适用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株，用于快速增值瘤细胞的培养。Ham’s F-10: 适用于小鼠细胞以及人的二倍体细胞的培养Ham’s F-12: 适用于单细胞培养或者克隆培养， 是无血清培养基中常用的基础培养基。MCDB131：适用于培养内皮细胞。Opti-MEM I Reduced Serum Media: 适用于培养造血细胞。本文转自科研狗发布于 2022-08-27 22:17赞同 7添加评论分享收藏喜欢收起普诺赛生物 关注细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。本期为大家整理了常见的细胞培养基种类，接下来我们一起来了解一下这些培养基和适用的细胞类型及选择方法。一、常见的细胞培养基基础培养基（MM）基础细胞培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞保持良好的生长状态。培养基的种类有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是应用较为广泛的。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。具体的特征及应用如下：培养基特征应用BME细胞培养基1955年Eagle设计，以BSS为基础，添加8种维生素，13种氨基酸，成分简单、便于添加适于各种细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等MEM细胞培养基由Harry Eagle在Eagle基本培养基（BEM）的基础上发展而来的。MEM培养基仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素，成分简单，主要用于贴壁细胞的培养，1959年修改配方，删去赖氨酸、生物素，增加氨基酸浓度，配方修改后也可用于其他类型细胞培养适合多种细胞单层生长，是一种最基本、适用范围最广的培养基。因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。此外，MEM细胞培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。应根据实际情况注意选择合适的 MEM 细胞培养基M199细胞培养基1950 年由 Morgan 等设计，除 BSS 外，含有53 种成分添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，可用于病毒学、疫苗生产以及大鼠胰腺上皮细胞和小鼠晶状体组织的培养DMEM细胞培养基由Dulbecco改良的 Eagle 培养基，DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和 DNA 转染的转化细胞培养。例如 CHO 细胞表达生产乙肝疫苗、CHO 细胞表达EPOIMDM细胞培养基由Iscove's改良的Eagle培养基，IMDM培养基在DMEM培养基的基础上添加了硒、HEPES、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素，营养非常丰富可用于杂交瘤细胞和高密度细胞的快速培养RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等成分广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养，尤其是悬浮细胞的培养Ham's F10、F12细胞培养基1963年、1969年由Ham设计，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10营养混合物为基础设计而成的，可在血清含量低时用F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，F12适用于CHO细胞。在低血清含量下时，特别适合单细胞培养和克隆化培养，添加血清后也广泛应用于癌细胞和原代细胞的培养，如大鼠肝细胞、大鼠前列腺上皮细胞、软骨细胞、大鼠成肌细胞、鸡胚胎细胞等DMEM/F12细胞培养基在DMEM培养基的基础上，添加F12培养基中更为丰富的营养成分，含有多种微量元素广泛应用于多种哺乳类细胞的培养。同时，常作为开发无血清培养基的基础，也适用于低血清含量下哺乳动物细胞的培养以及克隆密度培养McCoy's 5A培养基Thomas McCoy等人在1959年设计的培养基，最初专门用于Novikoff Hepatoma细胞的培养。McCoy's 5A培养基是改良的Basal Medium 5A，与其他培养基不同的是，McCoy's 5A含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖McCoy's 5A广泛用于多种类型的原代细胞的培养，如骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等。此外McCoy's 5A培养基还用于组织活检培养、细胞建系，以及一些淋巴细胞和较难培养的细胞的培养L15细胞培养基L-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成，代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统，同时，用半乳糖和丙酮酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成，有助于维持培养液PH的稳定，适合用于非CO2平衡环境的细胞培养L-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代（如胚胎和成人组织）细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等完全培养基（CM）完全培养基是在基础培养基中添加了血清、抗生素等物质，也叫（血清）细胞培养基。其中大部分细胞培养常用的是牛血清，因为牛血清中含有促进细胞增殖的各种生长因子。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。无血清细胞培养基（SFM）无血清培养基是指在合成培养基的基础上引入成分完全明确或部分明确的血清替代成分，主要是由基础培养基和添加物（替代血清的补充因子）组成。其主要成分为下列几种：黏附因子约有80%的细胞是属于贴附型生长。一般的细胞培养基是利用血清作为其来源，在无血清培养基中，细胞黏附因子就是很重要的物质。生长因子生长因子是维持细胞活性与促进细胞增生、迁移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制剂贴附型细胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）进行传代。在一般细胞培养中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以无血清培养基必须添加trypsin抑制剂。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。优点：01 未知组分少；02 避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染；03 杂蛋白含量少，避免血清成分影响研究结果或是产品制程，提高产品表达水平并易于纯化。缺点：01 无血清培养基成本较高；02 不是所有的细胞都能在无血清培养基中培养；03 细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基保存和应用方面局限性很大。二、细胞培养基的选择细胞培养基的种类很多，如何选择适宜的培养基是细胞培养的关键。在此提供以下建议可供参考：01 如果是新购买的细胞，可以向细胞株的厂家咨询，或者询问引种来源查找细胞库上对应的培养基；02 根据细胞的特点及实验的需要来选择培养基；03 自己试验，用多种培养基培养细胞，做生长曲线，记录细胞的生长速度，观察细胞的形态变化，根据实验结果选择最佳培养基。培养基种类和细胞系并不是一个强制的对应关系。具体培养细胞使用什么培养基，主要还是根据数据库、文献和经验哦！发布于 2023-12-12 14:54赞同 2添加评论分享收藏喜欢
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细胞培养基的种类有哪些？ - 知乎首页知乎知学堂发现等你来答切换模式登录/注册细胞细胞生物学微生物培养基细胞培养基的种类有哪些？关注者9被浏览5,031关注问题写回答邀请回答好问题添加评论分享6 个回答默认排序Dr.WhaleTexas A&M University PhD 关注经典的培养基有很多种，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是应用最广泛的培养基。其具体的特征及应用如下：1）BME细胞培养基基础Eagle培养基，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用。2）MEM细胞培养基又称低限量Eagle培养基，在Eagle's基础培养基（BME）上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基。3）DMEM细胞培养基分为低糖和高糖两种。低糖适用于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。4）IMDM细胞培养基用于培养红细胞和巨噬细胞前体。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。5）RPMI-1640细胞培养基针对淋巴细胞培养设计，含BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养，如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养。6）HamF10细胞培养基1963年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培养。7）DMEM/F12细胞培养基Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。8）M199细胞培养基M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。9）McCoy5A培养基MeCoy为肉瘤细胞设计，现可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长。10）L15 细胞培养基L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。发布于 2022-06-22 15:42赞同 3添加评论分享收藏喜欢收起苏州阿尔法生物苏州阿尔法生物实验器材有限公司 网络推广 关注嘿，小伙伴，HEK293细胞咋养啊？用啥培养基呀？哈哈，这个简单，毋庸置疑地告诉你，DMEM和RPMI都行啊！ HEK293细胞是广泛应用于科研领域的一种细胞模型，当然要注意选用适合它们的培养基啦。妥妥地，你得选择营养丰富、含有充足生长因子和营养成分的培养基啊。DMEM和RPMI这两个培养基都含有足够的碳水化合物、氨基酸和维生素，供给细胞所需的能量和材料，保证细胞生长和繁殖。HEK293细胞 这两种培养基各有千秋啊！DMEM培养基一般用于肿瘤细胞和无血清培养；而RPMI培养基则多用在白血细胞培养和肿瘤细胞等黏附生长条件下的培养。 当然，你也可以根据实验需求自己调制培养基哦。前提是要先知道HEK293细胞的营养需求和培养条件，然后选择合适的营养成分和浓度以及添加生长因子来制备培养基。自己调制培养基一方面可以节约成本，另一方面也可以尽量满足实验要求，提高实验结果的可靠性。 呀，童鞋们一定要注意培养基的配方和不同厂家之间的区别哦！前期试验时尽量先做一些小试验，评估培养基对HEK293细胞的影响，再在大规模培养时使用哦。同时也要关注HEK293细胞的生长状态和生理特点，及时调整培养基的配方和浓度，保证细胞的健康生长。 总之，选对培养基对于HEK293细胞的生长和实验结果至关重要！ 听说你在寻找KEK293细胞及细胞培养基？别担心，让我们帮您解决这一烦恼吧！苏州阿尔法生物除了有500多种肿瘤细胞，200多种基因编辑细胞外，还有细胞培养试剂、细胞培养耗材、实验耗材和 实验室仪器设备采购。发布于 2023-05-10 14:26赞同添加评论分享收藏喜欢
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细胞学堂 | 细胞培养基的种类以及如何选择
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2023-06-20 10:14:24
一 常见的细胞培养基细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。基础培养基（MM）基础细胞培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞保持良好的生长状态。培养基的种类有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是应用较为广泛的。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。具体的特征及应用如下：向上滑动阅览培养基特征应用BME细胞培养基1955年Eagle设计，以BSS为基础，添加8种维生素，13种氨基酸，成分简单、便于添加适于各种细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等MEM细胞培养基由Harry Eagle在Eagle基本培养基（BEM）的基础上发展而来的。MEM培养基仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素，成分简单，主要用于贴壁细胞的培养，1959年修改配方，删去赖氨酸、生物素，增加氨基酸浓度，配方修改后也可用于其他类型细胞培养适合多种细胞单层生长，是一种最基本、适用范围最广的培养基。因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。此外，MEM细胞培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。应根据实际情况注意选择合适的 MEM 细胞培养基M199细胞培养基1950 年由 Morgan 等设计，除 BSS 外，含有53 种成分添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，可用于病毒学、疫苗生产以及大鼠胰腺上皮细胞和小鼠晶状体组织的培养DMEM细胞培养基由Dulbecco改良的 Eagle 培养基，DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和 DNA 转染的转化细胞培养。例如 CHO 细胞表达生产乙肝疫苗、CHO 细胞表达EPOIMDM细胞培养基由Iscove's改良的Eagle培养基，IMDM培养基在DMEM培养基的基础上添加了硒、HEPES、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素，营养非常丰富可用于杂交瘤细胞和高密度细胞的快速培养RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等成分广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养，尤其是悬浮细胞的培养Ham's F10、F12细胞培养基1963年、1969年由Ham设计，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10营养混合物为基础设计而成的，可在血清含量低时用F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，F12适用于CHO细胞。在低血清含量下时，特别适合单细胞培养和克隆化培养，添加血清后也广泛应用于癌细胞和原代细胞的培养，如大鼠肝细胞、大鼠前列腺上皮细胞、软骨细胞、大鼠成肌细胞、鸡胚胎细胞等DMEM/F12细胞培养基在DMEM培养基的基础上，添加F12培养基中更为丰富的营养成分，含有多种微量元素广泛应用于多种哺乳类细胞的培养。同时，常作为开发无血清培养基的基础，也适用于低血清含量下哺乳动物细胞的培养以及克隆密度培养McCoy's 5A培养基Thomas McCoy等人在1959年设计的培养基，最初专门用于Novikoff Hepatoma细胞的培养。McCoy's 5A培养基是改良的Basal Medium 5A，与其他培养基不同的是，McCoy's 5A含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖McCoy's 5A广泛用于多种类型的原代细胞的培养，如骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等。此外McCoy's 5A培养基还用于组织活检培养、细胞建系，以及一些淋巴细胞和较难培养的细胞的培养L15细胞培养基L-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成，代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统，同时，用半乳糖和丙酮酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成，有助于维持培养液PH的稳定，适合用于非CO2平衡环境的细胞培养L-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代（如胚胎和成人组织）细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等完全培养基（CM）完全培养基是在基础培养基中添加了血清、抗生素等物质，也叫（血清）细胞培养基。其中大部分细胞培养常用的是牛血清，因为牛血清中含有促进细胞增殖的各种生长因子。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。无血清细胞培养基（SFM）无血清培养基是指在合成培养基的基础上引入成分完全明确或部分明确的血清替代成分，主要是由基础培养基和添加物（替代血清的补充因子）组成。其主要成分为下列几种：黏附因子约有80%的细胞是属于贴附型生长。一般的细胞培养基是利用血清作为其来源，在无血清培养基中，细胞黏附因子就是很重要的物质。生长因子生长因子是维持细胞活性与促进细胞增生、迁移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制剂贴附型细胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）进行传代。在一般细胞培养中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以无血清培养基必须添加trypsin抑制剂。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。优点1未知组分少；2避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染；3杂蛋白含量少，避免血清成分影响研究结果或是产品制程，提高产品表达水平并易于纯化。缺点1无血清培养基成本较高；2不是所有的细胞都能在无血清培养基中培养；3细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基保存和应用方面局限性很大。二细胞培养基的选择细胞培养基的种类很多，如何选择适宜的培养基是细胞培养的关键。在此提供以下建议可供参考：1如果是新购买的细胞，可以向细胞株的厂家咨询，或者询问引种来源查找细胞库上对应的培养基；2根据细胞的特点及实验的需要来选择培养基；3自己试验，用多种培养基培养细胞，做生长曲线，记录细胞的生长速度，观察细胞的形态变化，根据实验结果选择最佳培养基。培养基种类和细胞系并不是一个强制的对应关系。具体培养细胞使用什么培养基，主要还是根据数据库、文献和经验哦！
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